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基礎(chǔ)信息Product information
產(chǎn)品名稱:

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品簡介:

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:鋅指蛋白711抗體 G蛋白偶聯(lián)受體RAB23抗體 Hs-746T (人胃癌細(xì)胞) 大鼠軟骨細(xì)胞 MG63人骨肉瘤細(xì)胞 大鼠子宮成纖維細(xì)胞 293E (人胚腎細(xì)胞(EBNA1基因修飾)) 小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

訪問量:984

更新時(shí)間:2025-04-09

產(chǎn)品特性Product characteristics

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性:

組織來源

產(chǎn)品規(guī)格

細(xì)胞形態(tài)

貨號

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

內(nèi)皮細(xì)胞樣

YS-01X8432

細(xì)胞簡介:

兔腎臟微血管內(nèi)皮分離自腎臟;腎臟是兔的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu),可分為腎實(shí)質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到,腎實(shí)質(zhì)分內(nèi)外兩層:外層為皮質(zhì),內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實(shí)質(zhì)表層,富含血管,新鮮時(shí)呈紅褐色,由一百多萬個(gè)腎單位組成。每個(gè)腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成,部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間,成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面,血管較少,色淡紅,為10-20個(gè)錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面,向腎門,錐體主要組織為集合管,錐體稱腎乳頭,每一個(gè)乳頭有10-20個(gè)乳頭管,向腎小盞漏斗部開口。在腎竇內(nèi)有腎小盞,為漏斗形的膜狀小管,圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個(gè)腎小盞,相鄰2-3個(gè)腎小盞合成一個(gè)腎大盞。每腎有2-3個(gè)腎大盞,腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細(xì),移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個(gè)毛細(xì)血管團(tuán),稱為腎小球,腎小球是個(gè)血管球。它由腎動(dòng)脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層,兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管,尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米。基膜外面有薄層結(jié)締組織,其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,較粗的毛細(xì)血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管,內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)毛細(xì)血管;分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管,除有縫隙連接外,細(xì)胞本身有許多小孔,(孔徑800-1000埃),稱有孔毛細(xì)血管;分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管,管腔擴(kuò)大,稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)(8-10微米)、數(shù)量多、血流速度慢,這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場所,又稱交換血管。血竇(sinusoid)由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成,竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同,由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙;肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的,有較寬的細(xì)胞隙(0.1-0.5微米);肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜,通透性比毛細(xì)血管大,較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞,脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞,這兩種細(xì)胞都有吞噬能力,可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì),是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:

  一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

  1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;

  2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;

  3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);

  4、 胎牛血清濃度為10%-80%

  5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮;

  7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;

  8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

  二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

  1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;

  2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;

  3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);

  4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;

  5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;

  6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

方法簡介:

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化,結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測:

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息:

包被條件:PLL0.1mg/ml),明膠(0.1%

培養(yǎng)基:含FBSEGFbFGFIGFVEGFHeparinHydrocortisonePenicillinStreptomycin

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性:貼壁

細(xì)胞形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性:可傳2-3

消化液:0.25%

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%CO25%

兔腎臟微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存:

細(xì)胞傳代步驟細(xì)胞凍存步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:

  ① 組織塊培養(yǎng)法

  組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

  ② 消化培養(yǎng)法

  ③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

  對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

  ④器官培養(yǎng)

  器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞


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